Uma banca de DEFESA de MESTRADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE: MARIA JOSÉ BRYANNE ARAUJO SANTOS
DATA: 24/02/2022
HORA: 14:00
LOCAL: PLATAFORMA VIRTUAL
TÍTULO: Avaliação do efeito protetor do ácido fítico contra o dano ao DNA induzido por estresse oxidativo
PALAVRAS-CHAVES: Ensaio Cometa; Antioxidante; Reação de Fenton; Topologia do DNA.
PÁGINAS: 50
GRANDE ÁREA: Ciências Agrárias
ÁREA: Agronomia
RESUMO:

O dano oxidativo ao DNA resulta do processo ocasionado pela excessiva geração de espécies reativas de oxigênio (EROs). As fontes que geram essas EROs podem ser exógenas (como o tabagismo, radiação ionizante, poluentes do ar, pesticidas) e endógenas (processo de fosforilação oxidativa nas mitocôndrias). Estudos demonstram que o dano oxidativo ao DNA está relacionado a progressão de patologias como câncer, hipertensão, Parkinson, Alzheimer, aterosclerose e diabetes. O peróxido de hidrogênio (H2O2) é uma ERO que em interação com metais de transição, como Fe2+, produz um radical altamente reativo (•OH). Os antioxidantes naturais apresentam ação protetora contra o estresse oxidativo, eliminando as EROs. O ácido fítico (AF) ou mio-inositiol hexafosfato (IP6), é um composto natural encontrado em cereais, leguminosas e oleaginosas. A sua estrutura química confere a este composto uma característica de grande relevância, atuando como um antioxidante devido a sua propriedade quelante de íons, como por exemplo o ferro, inibindo assim a formação de radicais (•OH) via reação de Fenton. Considerando a atividade antioxidante do AF, o objetivo do presente trabalho foi avaliar o potencial antigenotóxico deste composto contra o dano oxidativo induzido pelo H2O2. Nos ensaios in vitro foram utilizados a linhagem celular L929 (fibroblastos de camundongo). Para a determinação da citotoxicidade do AF e do H2O2, foi utilizado o ensaio colorimétrico do MTT. O efeito antigenotóxico do AF foi analisado por duas metodologias distintas, o ensaio cometa alcalino e a análise da topologia de DNA plasmidial. Para a versão alcalina do ensaio cometa as células foram tratadas com as três concentrações de AF (1000, 100 e 10 ug/mL) por 24 horas, seguida de incubação com H2O2 (75 uM) por 30 minutos. Como controle positivo as células foram expostas somente ao agente oxidativo (H2O2 75 uM). A análise dos nucleoides foi realizada por score visual e foi calculado o percentual de dano com base no número de nucleoides em cada uma das classes, a saber: classe 0 (DNA íntegro); classe 1 (cauda mais curta que o diâmetro da cabeça); classe 2 (cauda com 1 ou 2x o diâmetro da cabeça); classe 3 (cauda maior que 2x o diâmetro da cabeça). Para a identificação de modificações na topologia do DNA, 150 ng do plasmídeo pET28a foram incubados com AF (nas três concentrações) na presença de FeSO4 (100 uM) e H2O2 (0,66%). Como controle positivo foi utilizado o quelante de ferro, Deferoxamina (200 ug/mL). As diferentes conformações estruturais do DNA: Forma I (DNA superenrolado); Forma II (DNA circular relaxado) e Forma III (DNA linear) foram separadas por eletroforese, quantificadas e analisadas pelo programa ImageJ. De acordo com os resultados do teste do MTT, foram escolhidas as concentrações do AF e do H2O2 que apresentaram viabilidade celular superior a 70% e 50%, respectivamente. Os resultados do ensaio cometa mostraram que nas três concentrações testadas do AF houve um percentual de proteção ao DNA de 87%, 98% e 99%, respectivamente, em relação ao controle positivo que apresentou uma elevação significativa de dano ao DNA (151%). No ensaio de topologia de DNA foi evidenciado as três concentrações de AF inibiram respectivamente, 18%, 16% e 33% a clivagem do DNA na forma II induzida pela via de Fenton. Embora outros estudos sejam necessários, como por exemplo, a atividade antimutagênica, estes resultados revelam que, nas concentrações testadas, o ácido fítico protege o DNA contra quebras induzidas pelo estresse oxidativo, demonstrando assim ser um composto antioxidante de ação antigenotóxica que pode estar relacionado a prevenção e/ou diminuição na incidência de patologias.

MEMBROS DA BANCA:
Externo à Instituição - EDSON LUIS MAISTRO
Presidente - 2213089 - RICARDO SCHER
Externo ao Programa - 2180134 - SILMARA DE MORAES PANTALEAO