Uma banca de DEFESA de DOUTORADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE: TAMIRIS APARECIDA DE CARVALHO SANTOS
DATA: 27/02/2024
HORA: 09:00
LOCAL: sala 1 do PPGAGRI
TÍTULO: Potencial antimicrobiano de derivados de chalconas e terpenos para o controle de microrganismos fitopatogênicos
PALAVRAS-CHAVES: Antifúngica, Antiprotozoária, Antibiofilme, membrana plasmática, Cetonas aromáticas, Monoterpenos.
PÁGINAS: 85
GRANDE ÁREA: Ciências Agrárias
ÁREA: Agronomia
RESUMO:

Os microrganismos fitopatogênicos infectam as plantas e causam doenças, estes são uma das principais causas de perdas na agricultura mundial, pois causam depreciação ou perda dos vegetais o que resulta em prejuízos econômicos. Os fungos são importantes patógenos de plantas dentre estes destacam-se os fungos, Macrophomina phaseolina, Sclerotium sp, Colletotrichum gloeosporioides e outros. As bactérias contaminam vegetais e são de difícil controle. A bactéria Acidovorax citrulli infecta cucurbitáceas como melão e melancia e causam a doença denominada mancha aquosa dos frutos. Dentre a classe dos protozoários a infecção em vegetais é restrita apenas ao gênero Phytomonas sp, a espécie P.serpens infecta frutos de tomate maduros, apesar de sua patogenicidade não ser totalmente elucidada os frutos apresentam pontos amarelos e o que afeta a aceitação do produto. O metabolismo secundário vegetal representa uma fonte de diversidade de substâncias com várias aplicabilidades biológicas e dentre elas o controle de microrganismos. As chalconas são cetonas aromáticas ligadas por um sistema carbonila α-β insaturado, os derivados de chalconas são moléculas que apresentam modificações na estrutura por meio da adição de grupos químicos aos anéis aromáticos. Os derivados de chalconas são produzidos no metabolismo secundários das plantas, mas também podem ser obtidos por meio da condensação aldólica de Claisen-Scmidt. Outros metabólicos importantes são óleos essenciais OEs que são compostos por uma mistura complexa formada por diversos constituintes. OEs apresentam como características a natureza oleosa, lipofílica e odorífera. Os OEs essenciais apresentam em sua composição classes de terpenos, que por sua vez, são formados por unidades de isopreno. O timol e o carvacrol são dois isômeros fenólicos monoterpenos que estão presentes em OEs de diversas espécies de plantas dentre elas a espécie Lippia gracilis. Ambos grupos de compostos chalconas e terpenos estão envolvidos em diversos processos no desenvolvimento vegetal, além de apresentam atividade antimicrobiana. O objetivo deste trabalho foi avaliar o potencial antifúngico, antibacteriano e antiprotozoário da chalcona e 14 derivados para os fungos Macrophomina phaseolina, Sclerotium sp, Colletotrichum gloeosporioides, as bactérias A. citrulli cepas CCRM1.39 e CCRM1.73 e o fitoparasita P. serpens, além de avaliar a atividade antimicrobiana de sete acessos de óleos essenciais Lippia grata e dos compostos majoritários timol e carvacrol para o controle de A. citrulli. O Screening antifúngico foi realizado pelo método de contato em meio BDA à 1Mm, foi calculada a IC₅₀ dos derivados mais ativos, a menor IC₅₀ foi utilizada para avaliação da permeabilidade da membrana fúngica com a sonda iodeto de propídeo (PI). No screening antibacteriano as cepas de A. citrulli foram crescidas em YM na concentração de 1mM, o crescimento foi avaliado por espectrofotometria (λ 600nm). No ensaio antiprotozoário o screening foi realizado com Schneider na concentração de 25µM, e os derivados mais ativos foram submetidos ao teste de IC₅₀ ambos os testes foram utilizados o método de rezasurina (50 µM) e avaliados por espectrofotometria. Para avaliação da atividade antimicrobiana de sete acessos LGRA (106,107,108,109,110,201 e 202) de Lippia gracilis, timol e carvacrol em A. citrulli CCRM1.39 foi realizado a determinação dos concentração mínima inibitória e mínima (CMI) bactericida CMB com concentrações de 1.000 à 31,2 µg/mL, foram selecionados o acesso 106, timol e carvacrol para os demais testes, como cinética de crescimento em diferentes tempos, atividade antibiofilme, efeito na permeabilidade da membrana e na motilidade bacteriana. Os dados de ambos estudos foram expressos em média e erro padrão da média, as médias submetidas análise de variância e teste de média Dunnet. A IC₅₀ dos derivados de chalconas foi calculada pela equação logarítmica, as análises foram processadas programa GraphPad Prism 8.1, e as imagens de microscopia de fluorescência no software ImageJ. A chalcona sem modificação CH0 e os derivados CH1, CH2, CH8 apresentaram potencial antifúngico para os três fungos testados, com diferentes níveis de sensibilidade, CH0 apresentou alta atividade inibitória para C. gloeosporioides, a IC₅₀ foi de 47,31±2,395µM ou 9,84 µg/mL, a IC₅₀ promoveu o incremento de PI o que indica que o possível mecanismo de morte é necrose da membrana plasmática fúngica. Os derivados CH1, CH8 e CH2 apresentaram promissoras atividades antifúngicas o que demonstra que o grupo furano no anel B assim como adições de metoxilas no anel A na estrutura da chalcona também contribui para atividade antifúngica. A série de chalconas metoxiladas forte atividade inibitória para o fitoparasita P. serpens o derivado mais ativo foi CH2 com menor IC₅₀ 0,989±0,111µM. Todos os óleos essenciais dos acessos promoveram 100% de inibição do crescimento de A. citrulli na concentração de 1.000µg/mL. No screening de essenciais de Lippia gracilis com a bactéria a bactéria A. citrulli, o acesso 106 foi o mais ativo entre os acessos testados. Timol e carvacrol apresentaram CMIs de 250µg/mL enquanto 106 o valor foi de 500µg/mL. O timol promoveu inibição do biofilme bacteriano com a CMI de 250µg/mL, já o carvacrol apenas inibiu com 2XCMI equivalente à 500 µg/mL. A cinética bacteriana indicou que timol, carvacrol e 106 na concentração de CMIs e 2XCMIs reduziram o crescimento bacteriano em relação ao controle a partir de 30 min de exposição. CMIs do timol, carvacrol e do acesso 106 promoveram a perda da permeabilidade da membrana bacteriana com exposição de 5min.A motilidade bacteriana de A. citrulli foi reduzida com exposição de CMI e ½ CMI do timol e com CMI do carvacrol. Tais resultados indicam o potencial dos compostos testados para microrganismos fitopatógenos estudados.

MEMBROS DA BANCA:
Externo à Instituição - CAMILA DE SOUZA VARIZE LOPES
Externo à Instituição - MARCELO DA COSTA MENDONCA
Interno - 1432726 - PAULO ROBERTO GAGLIARDI
Externo ao Programa - 426467 - PERICLES BARRETO ALVES
Presidente - 2208516 - ROBERTA PEREIRA MIRANDA FERNANDES