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ALYNNE KAREN MENDONÇA DE SANTANA
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Efeito leishmanicida e apoptótico do óleo essencial de Lippia gracilis e do carvacrol em formas promastigotas de Leishmania chagasi
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Orientador : RICARDO SCHER
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Data: 31/07/2013
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Dissertação
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A Leishmaniose Visceral (LV) é uma doença parasitária, que no Brasil é causada pela Leishmania chagasi, com grande impacto na saúde pública devido sua prevalência e gravidade, podendo levar a morte quando não tratada. O tratamento da LV é baseado na quimioterapia, porém o valor clínico dos medicamentos disponíveis tem sido questionado devido à alta toxicidade e efeitos colaterais que apresentam, além da resistência reportada em alguns isolados. Assim, a busca por novas estratégias terapêuticas eficazes é necessária para que se possa desenvolver novas e melhores drogas para o tratamento da LV. Os produtos naturais representam uma vasta fonte de novos agentes terapêuticos para o tratamento de enfermidades humanas. O presente estudo teve como objetivo avaliar o efeito leishmanicida e apoptótico do óleo essencial de Lippia gracilis (OELG) e do carvacrol. Promastigotas de Leishmania chagasi foram incubados na presenca de concentrações crescentes do oleo essencial e do carvacrol por 24 horas. Após esse período foi realizada a contagem dos parasitas em câmera de Neubauer. A IC50 e a CC50 foram determinadas por análise de regressão. A avaliação das alterações na permeabilidade da membrane dos promastigotas foi realizada através da marcação com Iodeto de Propídeo (IP), e para a detecção de morte por apoptose foi utilizada a dupla marcação com anexina V e iodeto de propídio (IP). Todas as análises foram realizadas utilizando o citômetro de fluxo Attune® Acoustic Focusing (Life Technologies). O crescimento dos parasitas foi inibido de forma eficiente quando incubados com o OELG e seu componente majoritário, carvacrol. As IC50 encontradas para o OELG e carvacrol foram de 85.2 e 86.9 μg.mL-1, respectivamente. Embora a CC50 para os macrófagos murinos seja de 101,77 e 48,92 μg.mL-1, para o OELG e carvacrol, respectivamente. Estes dados indicam que o carvacrol apresentou maior citotoxicidade, com um índice de seletividade (IS) de 0,56, enquanto o OELG apresentou 1,19. As analyses da morfologia dos promastigotas por citometria de fluxo revelaram que o OELG e o carvacrol induziram uma retração no tamanho dos parasitas. Um aumento gradual foi observado em células IP positivas, indicando que o tratamento com o óleo essencial e o carvacrol modificam a permeabilidade da membrana. Por outro lado, o percentual de promastigotas positivos para anexina V reduziu com o aumento das concentrações do OELG. Entretanto, o número de células que apresentou dupla marcação para anexina V e IP aumentou, indicando que o OELG gera um efeito de apoptose tardia. Já o tratamento com 60 μg.mL-1 do carvacrol mostrou intensa degradação dos parasitas e apresentou características de morte por necrose. Desta forma, os resultados sugerem que o efeito leishmanicida do OELG é mediado por apoptose, enquanto o a morte celular induzida pelo tratamento com o carvacrol apresenta características de necrose.
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DEISYLAINE MARIA DOS SANTOS
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COMPOSIÇÃO QUÍMICA E AVALIAÇÃO DAS ATIVIDADES REDOX PROTETORA E ANTIMICROBIANA DA ENTRECASCA DE Bauhinia cheilantha (Bong) Steud
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Orientador : CHARLES DOS SANTOS ESTEVAM
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Data: 31/07/2013
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Dissertação
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A composição química, as atividades antioxidante e antimicrobiana do extrato hidroetanólico (EHE) e de suas frações hexânica (FH), clorofórmica (FCL), acetato de etila (FAE) e hidrometanólica (FHM) obtidos da entrecasca de Bauhinia cheilantha, popularmente conhecida como "mororó-do-sertão", foram investigadas. A composição química foi avaliada através de métodos colorimétricos, Folin-Ciocalteau, complexação com o alumínio e cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE). Quanto à atividade antioxidante, esta foi avaliada através de dois métodos, o do radical 2,2 difenil-1-picril-hidrazila (DPPH•) para EHE, FCL, FAE, FHM e o das substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS), frente às amostras EHE, FCL, FAE, FHM, utilizando os agentes indutores da lipoperoxidação, 2-amidino-propano (AAPH) e sulfato ferroso (FeSO4). Os dados foram expressos como média desvio padrão e as diferenças determinadas por ANOVA seguida do teste de Tukey. O maior teor de fenóis totais foi observado no EHE, seguido da FAE. Este comportamento também foi observado para com o teor de flavonoides nestas mesmas amostras, além da FHM. Através da CLAE/ DAD-UV-VIS foi observado a presença da substância catequina na concentração de 65,23 ± 0,08 µg/mg na sub fração SF-1 da FHM. Com relação à atividade antioxidante, a FAE e FHM reduziram o radical DPPH (30 µg/ml, 60 min) com valores de CE50 de 6,73±0,08 e 28,27±1,79 µg/mL, re spectivamente. Por outro lado, frente ao TBARS, o EHE e as frações FCL, FHM e FAE mostraram maior afinidade em neutralizar a lipoperoxidação induzida pelo AAPH que por FeSO4.O extrato e as frações FAE e FHM da entrecasca de B.cheilantha apresentaram atividade antimicrobiana frente a alguns microrganismos Gram +, Gram – e levedura com halos de inibição de 9,6±0,58 a 19,67±0,58. Diante destes resultados, pode-se inferir que o extrato hidroetanólico e frações de B. cheilatha possuem diversos constituintes químicos, tais como fenois, taninos, flavonoides, destacando-se a substância catequina. Além disso, apresentam atividade antioxidante e antimicrobiana.
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ARLIK RAFAEL SANTIAGO DE SOUSA
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DIVERGÊNCIAS MORFOMÉTRICAS E COMPORTAMENTAIS EM Apis mellifera L. (HYMENOPTERA: APIDAE)
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Orientador : LEANDRO TEIXEIRA BARBOSA
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Data: 31/07/2013
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Dissertação
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As abelhas do gênero Apis estão amplamente distribuídas pelas regiões tropicais do planeta, sendo fundamentais no papel de polinizadores. No Brasil, estas são um poliíbrido formado pelo cruzamento entre a subespécie africana Apis mellifera scutellata e as subespécies europeias. Devido a hábitos generalistas, a introgressão de alelos da subespécie africana tem levado a uma predominância nas características desta em relação às europeias. O presente trabalho teve como escopo a caracterização da divergência entre 71 colônias de A. mellifera africanizadas, situadas em três distintas ecorregiões (Zona da Mata, Agreste e Sertão) do Estado de Sergipe, nordeste do Brasil, por meio de análises morfológicas e comportamentais, com o objetivo de avaliar as relações entre os efeitos da sazonalidade e dos distintos padrões morfoclimáticos das ecorregiões na morfologia, comportamento e distribuição desses grupos de abelhas. Neste estudo foram utilizadas técnicas de morfometria geométrica, com observação dos marcos anatômicos da venação alar, com o auxílio do software Tps/DIG e avaliação do comportamento higiênico pelo método de perfuração de crias em dois períodos estacionais, o seco e o chuvoso. A correlação entre os índices de comportamento higiênico e as variáveis ambientais foi obtida por meio da correlação de Spearman e as relações de causalidade por meio da análise de trilha, com o auxílio do software R. As análises morfométricas foram realizadas por meio de técnicas de análise multivariada, com o auxílio dos softwares MORPHOJ e PAST. Assim, os resultados deste trabalho demonstraram que o intenso fluxo gênico evidenciado entre as colônias estudadas e as diferenças pronunciadas nos distintos apiários e ecorregiões, com influência da altitude na forma (r=0,06239; p= 0.05) e tamanho (0.001) contribuíram, portanto, para a separação desses grupos como resultado da plasticidade fenotípica e não de divergência genética entre as populações de abelhas africanizadas. Além disso, os resultados também demonstraram haver diferença significativa no comportamento higiênico dessas populações, entre os períodos seco e chuvoso (p= 0,022 α=0,05) e entre as ecorregiões (p=0,001; α=0,05), com influência da temperatura (ρ=0,065 p=0,471; α=0,05) e altitude (ρ=-0,294; p=0,001; α=0,05) sobre a pluviosidade (ρ=0,274 p=0,002; α=0,05) sendo esta o principal modulador do comportamento higiênico, reforçando a influência de fatores ambientais na manifestação dessa característica. Portanto, conclui-se pela influência de fatores estocásticos na morfologia, comportamento e distribuição das abelhas africanizadas, onde os polifenismos encontrados denotam a grande variabilidade genética dessas populações, fato esse que pode ser explorado em futuros programas de conservação, manejo e melhoramento.
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LEISE NASCIMENTO MOREIRA
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"Perfil Químico e Atividade Biológica dos Extratos e Frações de SYZYGIUM CUMINI L. SKeels"
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Orientador : CHARLES DOS SANTOS ESTEVAM
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Data: 29/07/2013
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Dissertação
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Planta de grande porte originária do oriente, o Syzygium cumini (L.) Skeels (Jambolão) adaptou-se muito bem às condições climáticas e aos vários tipos de solo do Brasil. Atualmente, seus frutos, sementes, folhas e entrecasca são muito utilizados na medicina popular devido à alta atividade antioxidante, antiinflamatória, anticarcinogênica e principalmente hipoglicemiante, associadas à presença de compostos fenólicos. Estima-se que no mundo pelo menos 300 milhões de pessoas desenvolvam diabetes e no Brasil, avalia-se que cerca de 11 milhões de indivíduos sejam portadores da doença. Assim, este estudo teve por objetivo avaliar o perfil químico e as atividades biológicas dos extratos hidroetanólicos (EHE) e frações das folhas e das entrecascas do S. cumini (L.) Skeels, coletadas em Estância/Se. Inicialmente foi produzido o EHE e a partir dele realizada uma partição líquido-líquido para obtenção das frações com diferentes graus de polaridade. Em seguida foi realizada a prospecção fitoquímica, quantificação de fenóis totais, flavonóides e flavonóis para caracterizar quimicamente os EHE e as frações obtidas, além de avaliar a atividade antioxidante através de teste usando o radical livre 2,2’-difenil-1-picril-hidrazina (DPPH) e a lipoperoxidação induzida por sulfato ferroso. Os perfis cromatográficos do EHE e da fração acetato de etila (FAE) das entrecascas foram analisados por cromatografia líquida de alta eficiência com detecção por arranjo de fotodiodos (CLAE-DAD) utilizando H2O/MeOH como fase móvel. A capacidade de inibição da enzima α-amilase foi verificada para os EHE, FAE e fração hidrometanólica (FHM) das folhas e entrecascas. Por fim, foi realizado ensaio in vivo com ratos normoglicêmicos com o EHE e a FAE das folhas e das entrecascas para avaliar a ação antidiabética por meio do teste de tolerância oral à glicose (TOTG). Os dados foram expressos em média DPM e os valores de p significativos quando p<0,05, utilizando a análise de variância ANOVA de uma via seguida dos pós-testes de Tukey e Bonferroni. Diante dos resultados foi possível identificar a presença de diversos metabólitos como fenóis, taninos, flavonóides, saponinas e triterpenos, nas folhas e entrecascas do jambolão. A FAE das entrecascas apresentou o maior conteúdo de fenóis totais (269±2,1 mg EAG/g do extrato), flavonóides (399±0,6 mg EQ/g do extrato) e flavonóis (420±2,4 mg ER/g do extrato). No que se refere à atividade antioxidante frente ao radical DPPH• e à lipoperoxidação, o EHE (CE50 = 7,56±0,007 mg/g do extrato) e a FAE (CE50 = 4,66±0,46 mg/g do extrato) das entrecascas apresentaram atividade superior em relação às outras frações quando comparadas ao ácido gálico, sendo que a FAE das folhas também mostrou atividade expressiva (CE50 = 9,05±0,17 mg/g do extrato) para o radical DPPH•. Na análise realizada por meio do CLAE-DAD analítico foi possível confirmar a presença de terpenos no EHE e de compostos fenólicos na FAE das entrecascas. O EHE, a FAE e a FHM das folhas apresentaram capacidade para inibir a enzima α-amilase maior que 80%, enquanto que o EHE das entrecascas mostrou a capacidade para modular a glicemia de ratos não diabéticos em 19% a partir de 15 minutos por meio do TOTG. Diante do exposto conclui-se que o EHE e a FAE das entrecascas apresentaram melhor perfil químico e atividade antioxidante agregada à presença de terpenos e compostos fenólicos; as amostras das folhas possuem uma capacidade antiamilolítica expressiva e o EHE das entrecascas tem efeito modulador da glicemia, sendo assim, recomendadas para evitar picos hipoglicêmico.
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RICARDO DA SILVA CELESTINO
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Caracterização Molecular Via Marcadores AFLP, Agronômica e Química de Germoplasma de Vetiver [Chrysopogon zizanioides (L.) Roberty].
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Orientador : ARIE FITZGERALD BLANK
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Data: 29/07/2013
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Dissertação
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O vetiver [Chrysopogonzizanioides (L.) Roberty] é uma planta perene originária da Índia, pertencente à família Poaceae que apresenta características medicinais e aromáticas. Esta espécie apresenta características químicas e agronômicas que as conferem importante valor econômico e ambiental, sendo o óleo essencial extraído de suas raízes amplamente utilizado na indústria de perfumaria e cosméticos. O vetiver também apresenta atividades diuréticas, anti-hipertensiva e antimicrobiana, e devido ao seu vasto e resistente sistema radicular tem sido utilizado como uma técnica de bioengenharia na estabilização de encostas e áreas erodidas e no tratamento de solos e água contaminada. Devido ao interesse econômico por essa espécie, estudos de caracterização agronômica, molecular e química tornam-se fundamentais a fim de gerar informações necessárias para exploração sustentável do vetiver. Assim, este trabalho teve como objetivo a caracterização agronômica, molecular por meio de marcadores AFLP e química de acessos de Chrysopogonzizanioides do Banco Ativo de Germoplasma da Universidade Federal de Sergipe. As características moleculares foram estudadas com marcadores AFLP, utilizando um total de 14 combinações de primers que geraram 442 marcas, permitindo verificar que os acessos de vetiver caracterizados possuem genomas próximos, sendo agrupados em três grupos distintos, onde o acesso UFS-VET005 foi o mais diferenciado.Na caracterização agronômica e química foram avaliadas as variáveis massa seca da parte aérea (g), massa seca da raiz (g), teor (%), rendimento (mL/touceira) e composição química do óleo essencial. Os óleos essenciais foram obtidos por hidrodestilação e analisados por CG-EM/DIC. O acesso UFS-VET004 apresentou a menor teor de óleo essencial (0,70%).Houve variação no teor dos constituintes químicos dos óleos essenciais, com predominância do composto khusimol que variou de 18,97 a 25,02%e foi possível distinguir os acessos de vetiver em dois grupos com base na composição química, que não apresentaram relação com os agrupamentos moleculares.
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ALEXANDER FRANÇA SANTOS
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"Screening e Caracterização de Leveduras Extrídas de Frutos Tropicais com alta produção de Proteases e Poligalacturonases".
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Orientador : ROBERTA PEREIRA MIRANDA FERNANDES
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Data: 28/02/2013
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Dissertação
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FRANÇA-SANTOS, ALEXANDER. Screening e caracterização de leveduras com alta produtividade de proteases e poligalacturonases. Sergipe: UFS, 2013. 80p. (Dissertação - Mestrado em Biotecnologia de Recursos Naturais) Comitê de Orientação: Profª. Drª Roberta Pereira Miranda Fernandes - UFS (Orientadora), Antônio Márcio Barbosa Júnior - UFS (Co-orientador) As leveduras são de grande interesse no que se refere à produção em larga escala de enzimas, pelo fato de apresentarem crescimento rápido e excreção de enzimas, o que é vantajoso em processos industriais e com fins biotecnológicos. As proteases são um conjunto de hidrolases que clivam ligações peptídicas e são utilizadas na indústria no processamento de alimentos, bebidas, formulação de detergentes, processamento de couro e pele, amaciamento de carne, formulação de medicamentos, etc. As poligalacturonases também são hidrolases, mas que clivam ligações α-1,4 glicosídicas despolimerizando substâncias pécticas. Estas enzimas são amplamente utilizadas em indústrias de sucos de frutas na redução de sua viscosidade, na fermentação de chás, café e cacau, na extração de polpa de tomate, etc. Dessa forma, o objetivo deste estudo foi selecionar e caracterizar micro-organismos leveduriformes, extraídos diretamente de frutos tropicais, que apresentem alta produção proteases e poligalacturonases. As leveduras isoladas de mangaba, pitanga, acerola, umbu e jabuticaba foram mantidas em crioscopia e selecionadas quanto à capacidade de produção de proteases em meio sólido e meio líquido mínimo para fermentação (MMF). A produção de poligalacturonases foi avaliada em meio mínimo para fermentação (MMF). A determinação da atividade enzimática foi realizada espectrofotometricamente, sendo que para as proteases foi utilizada a metodologia da azocaseína e para a poligalacturonase a do ácido di-nitrosalicílico (DNS). Após seleção dos isolados com alta produtividade dessas enzimas extracelulares, a produção das enzimas e suas atividades foram caracterizadas quanto a temperatura e pH ótimos. Um total de 521 leveduras foram avaliadas quanto à produção de proteases e Schwanniomyces polymorphus foi selecionada por apresentar alta produção de enzimas proteolíticas em meio MMF a 28ºC e pH 7,8. Quanto a caracterização das enzimas proteolíticas presentes no sobrenadante da cultura a temperatura ótima foi de 35ºC e pH 8,0. Cryptococcus humicolus (Asterotremella humicola (Dasz.)) foi selecionada entre 93 leveduras por apresentar alta produção da enzima poligalacturonase em meio MMF a 30ºC e pH 5,5. Quanto a caracterização da atividade da poligalacturonase a temperatura ótima foi de 30ºC e pH 3,0. Schwanniomyces polymorphus e Cryptococcus humicolus (Asterotremella humicola (Dasz.)) foram selecionadas como leveduras que apresentam alta produtividade de enzimas proteolíticas e poligalacturonases extracelulares, respectivamente.
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ANA GORETE CAMPOS DE AZEVEDO
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"Ocorrência, distribuição e caracterização de fungos entomopatogênicos isolados em solo naturale cultivado"
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Orientador : RENATA SILVA MANN
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Data: 28/02/2013
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Dissertação
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RESUMO - Esse estudo objetivou avaliar a ocorrência e diversidade de fungos entomopatogênicos em Sergipe, considerando os fatores que afetam a sua distribuição. A análise foi realizada através de amostras de solos obtidas nas três mesorregiões que dividem o estado, em dois períodos de coleta, compreendendo uma estação seca e uma úmida, e em dois diferentes habitats (agrícola e natural). Parâmetros como pH, matéria orgânica e argila do solo foram considerados nas análises. Para o isolamento do fungo do solo foram utilizados dois métodos, solução de solo em meio de cultura seletivo e inseto-isca. Em um total de 48 amostras de solo, 41,7% foram consideradas positivas quanto a presença de fungos entomopatogênicos. Os fungos isolados foram pertencentes aos gêneros Beauveria, Metarhizium e Isaria, da ordem Hypocreales. Verificou-se que os fatores referentes ao local de amostragem do solo (região, período e habitat) não mostraram diferenças significantes quanto as suas variáveis em relação à presença de fungos entomopatogênicos, diferente dos fatores do solo (pH, quantidade de matéria orgânica e argila) que mostraram significância. Os isolados foram submetidos a uma análise da variabilidade genética através da técnica molecular RAPD, foram selecionados 15 primers que produziram um total de 179 bandas (Beauveria) e 131 bandas (Metarhizium) e foram construídas matrizes de similaridade utilizando o coeficiente de Jaccard, que geraram dendrogramas através do método de agrupamento UPGMA, para cada fungo. Observou-se baixa similaridade genética entre os isolados de ambos os gêneros. Nesse trabalho, isolou-se fungos entomopatogênicos que podem ser úteis para o controle biológico na agricultura por tratar-se de isolados que apresentam certa persistência em condições adversas de temperatura, umidade e radiação UV.
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TARSIZIO DA SILVA SANTOS
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"Qualidade do sêmen criopreservado de carneiros alimentados com ácidos graxos poli-insaturados complexados com sais de cálcio."
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Data: 28/02/2013
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Dissertação
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Fontes de lipídios a base de ácidos graxos poli-insaturados têm sido usadas para melhoria dos aspectos quantitativos e qualitativos do sêmen criopreservado. A suplementação de óleos insaturados em dietas para ruminantes requer a adição de um protetor que facilite a sua absorção. O objetivo do estudo foi avaliar a influência de diferentes níveis de ácidos graxos poli-insaturados na dieta ao perfil de ácidos graxos e na qualidade dos espermatozoides criopreservados de carneiros. Vinte e quatro carneiros da raça Santa Inês foram distribuídos aleatoriamente em quatro grupos alimentados durante 90 dias com dietas isoprotéicas: G0 - sem ácidos graxos poli-insaturados complexados com sais de cálcio (PUFA-Ca) e G3, G6 e G9 com PUFA-Ca em teores de 3, 6, 9%, respectivamente. O sêmen foi coletado e congelado em palhetas nos períodos: 0 (P0), 30 (P30), 60 (P60) e 90 (P90) dias do início da administração das dietas. As amostras de sêmen in natura foram analisadas quanto à motilidade subjetiva, e ao perfil de ácidos graxos, enquanto que aquelas descongeladas foram analisadas quanto à cinética espermática em sistema computadorizado, integridade das membranas espermáticas e capacitação e reação acrossomal. Os dados obtidos foram submetidos à análise multivariada com o teste de comparação de médias entre os tratamentos, quanto ao perfil de ácidos graxos dentro do P90, com o coeficiente de correlação para os eixos 1 e 2 NMS e com coeficiente de correlação dos parâmetros dos espermatozoides para os eixos 1 e 2 NMS com teste de Monte Carlo, ao nível de significância mínimo de 5%. No experimento 1 foram identificadas menores proporções dos ácidos esteárico, oleico, g-linolênico, araquidônico nos espermatozoides dos carneiros do grupo tratado com 9% de PUFAs-Ca (G9), quando comparado ao grupo controle (G0) aos 90 dias da administração da dieta. No experimento 2 foram observadas menores médias nos parâmetros cinéticos ALH e VCL dos espermatozoides dos carneiros alimentados pela dieta 9%. Conclui-se que a suplementação da dieta de carneiros com 9% de ácidos graxos poli-insaturados complexados com sais de cálcio por um período de 90 dias produz uma mudança no perfil de ácidos graxos dos espermatozoides ovinos associada significativamente à diminuição das proporções dos ácidos esteárico, oleico, g-linolênico, araquidônico, do somatório de ácidos graxos poli-insaturados e da razão entre os somatório dos ácidos graxos poli-insaturados e saturados, além de reduzir a qualidade do sêmen criopreservado associada ao deslocamento lateral da cabeça e a velocidade curvilinear.
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ALVARO MARCIO DE OLIVEIRA SANTOS
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"Análise química e efeitos letais e sub-letais do óleo essencial de patcholi e sua nanoemulsão em populações de Sitophilus zeamais(Coleoptera: Curculionidae)".
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Orientador : LEANDRO BACCI
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Data: 27/02/2013
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Dissertação
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O gorgulho do milho (Sitophilus zeamais) é uma das pragas de grãos armazenados de maior importância no mundo. O uso indiscriminado de inseticidas convencionais tem levado à seleção de populações de S. zeamais resistentes. Apesar dos óleos essenciais (OE) de plantas serem considerados uma alternativa ao uso de inseticidas convencionais, sua amplitude de utilização frente às populações de insetos com capacidades distintas de resistência ainda não foi determinada. Neste trabalho analisamos a toxicidade do OE de Pogostemon cablin e da nanoemulsão à base desse OE sobre nove populações de S. zeamais provenientes de diferentes regiões do Brasil. Para isso foram realizados bioensaios de aplicação tópica, contato, fumigação, repelência e efeitos sobre o crescimento populacional. Foram identificados quinze compostos no OE de P. cablin, sendo o patchoulol o componente majoritário (55,04%). O OE de P. cablin demonstrou atividade inseticida sobre as nove populações de S. zeamais quando aplicado topicamente. O tempo necessário para causar 50% de mortalidade das populações foi em média 33,4 horas. As nove populações de S. zeamais responderam de modo semelhante ao OE de P. cablin. As doses letais para matar 50% das populações resultaram em baixas razões de toxicidade (<2). A população de Viçosa-MG foi a mais susceptível ao OE de P. cablin, com DL50 de 9,17 e 8,01 μg mg-1 após 48 e 72 horas de exposição, respectivamente. A maior tolerância ao OE de P. cablin foi detectada na população de Sete Lagoas-MG, que apresentou aumento na DL50 de 1,77 e 1,53 vezes. A concentração do OE de P. cablin necessária para causar 50% de mortalidade das populações por contato e fumigação variou de 0,34 a 0,43 μl ml-1 e 28,6 a 33,5 μl l-1, respectivamente. Já a nanoemulsão de P. cablin apresentou CL50 que variaram de 1,28 a 8,84 μl ml-1 e 32,7 a 39,5 μl l-1. Houve aumento da toxicidade por contato e fumigação (CL50) da nanoemulsão de P. cablin de 48 para 72 horas de exposição. A toxicidade (CL50) por contato e fumigação sobre as populações de Viçosa-MG e Sete Lagoas-MG após 48 e 72 horas de exposição ao OE de P. cablin foi, na maioria das vezes, maior do que a toxicidade causada pela nanoemulsão de P. cablin. O OE e a nanoemulsão de P. cablin foram repelentes nas CL50 e CL70 em todos os tempos de exposição para a população de Viçosa-MG. O mesmo ocorreu com a população de Sete Lagoas-MG, exceção para a CL50 após 4, 6 e 8 horas de exposição e para a CL70 após 24 horas de exposição à nanoemulsão de P. cablin. Para a população de Viçosa-MG, não houve diferença na repelência causada pelo OE e nanoemulsão de P. cablin. Já para a população de Sete Lagoas-MG, o OE de P. cablin causou maior repelência a esta população se comparado a nanoemulsão deste OE. Concentrações crescentes da nanoemulsão de P. cablin resultaram em redução do ri e do consumo de grãos das duas populações. As populações de Viçosa-MG e Sete Lagoas-MG entraram em declínio (ri<0) a partir das concentrações de 50,15 e 67,29 μl kg-1, respectivamente.
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CARLOS RODOLFO SAMPAIO
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ATIVIDADE ESPECÍFICA DO EXTRATO BRUTO E ESTABILIDADE A DIFERENTES TEMPERATURAS E VALORES DE Ph DE XILANASES EXTRACELULARES BACTERIANAS
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Data: 27/02/2013
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Dissertação
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SAMPAIO, Carlos Rodolfo. Atividade específica do extrato bruto e estabilidade a diferentes temperaturas e valores de pH de xilanases extracelulares bacterianas. Sergipe: UFS, 2013. 38p. (Dissertação Mestrado em Biotecnologia)
Resumo As xilanases apresentam papel relevante como biocatalisadores de diferentes processos agroindustriais, como a sacarificação de resíduos vegetais para a produção de etanol e o clareamento de polpas de madeira para a produção de celulose. Em escala industrial, estes processos podem requerer pH e, ou, temperatura extremos, os quais demandam enzimas compatíveis com estas condições. A maioria das enzimas disponíveis ou com potencial comercial é sintetizada de fungos ou de bactérias pertencentes a poucos gêneros. A avaliação de bactérias de isolamento raro constitui-se em estratégia importante para ampliar a diversidade de xilanases e suas potencialidades em termos de atividade, estabilidade e aplicação tecnológica. O objetivo deste trabalho foi avaliar uma coleção de bactérias do solo de isolamento comum e raro quanto à atividade de xilanases e caracterizar estas enzimas quanto à estabilidade a condições contrastantes de temperatura e pH. A coleção analisada é composta de 120 isolados com representantes de seis filos e foi submetida à seleção quanto à atividade de xilanases em culturas puras e no extrato proteico extracelular (EPE). Para a avaliação das culturas, utilizou-se como critério de seleção a relação entre os diâmetros de halos de hidrólise de xilana e das colônias em meio sólido (relação H:C), incubado a 30 oC por até 14 dias. Os efeitos de diferentes fontes de variação da fase de isolamento destas bactérias (solo de origem, meio de cultura, agente solidificante, diluição do inóculo e método de plaqueamento e tempo de incubação até surgimento de colônias) e do grupo de isolamento bacteriano (raro ou comum) sobre a frequência de isolados com alta atividade de xilanase foram avaliados com base na relação H:C. EPEs foram obtidos em meios líquidos contendo xilana inoculados com os onze isolados com maiores relações H:C. Os extratos foram avaliados quanto à atividade específica de xilanases a 50 oC, por 1 h. Os extratos dos três isolados com maior potencial de atividade sob esta condição foram avaliados quanto à temperatura ótima de atividade, estabilidade de atividade a 60 oC e a valores de pH 4,0, 5,5 e 8,0. Vinte e dois isolados (25%), incluindo oito de isolamento raro, apresentaram atividade de xilanase nas condições avaliadas, sendo encontrada uma alta variabilidade (>230%) entre estes isolados. Nenhum fator de isolamento ou a condição de isolado raro ou comum foram associadas à eficiência de atividade de xilanases em meio sólido. Alta variabilidade de atividade específica de xilanases nos EPEs também foi encontrada entre os isolados (1500%), com destaque para dois de cultivo raro (TC119 e TC21), da classe Alfaproteobacteria, e um de cultivo comum (TC99), da família Ralstoniaceae. As xilanases extracelulares de TC119 e TC21 apresentaram elevada atividade relativa em temperaturas de até 70 oC e foram pouco sensíveis ao pH na faixa de 4,0 a 8,0; entretanto, as de TC99 apresentaram temperatura ótima de 40 oC, baixa estabilidade a temperatura e pH. Xilanases extracelulares de TC119 não apresentaram atividade celulolítica. Bactérias do solo de isolamento raro apresentam alto potencial como fonte de xilanases extracelulares adaptadas a condições extremas de pH e temperatura requeridas em processos agroindustriais.
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JADSON PINHEIRO SANTOS
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"Cinética espermática e fertilização de ovócitos de tambaqui Colossoma macropomum com sêmen in natura e criopreservado".
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Data: 22/02/2013
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Dissertação
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A fertilização artificial de ovócitos de peixes com sêmen criopreservado tem sido pouco estudada, não fornecendo informações da aplicabilidade dos protocolos de criopreservação desenvolvidos para cada espécie. O objetivo do presente estudo foi avaliar a cinética espermática do sêmen de tambaqui e determinar um protocolo de fertilização artificial de ovócitos com sêmen in natura e criopreservado. Foram utilizados seis machos e duas fêmeas para as avaliações com sêmen in natura e criopreservado. Após a coleta do sêmen, a cinética espermática foi avaliada pelo sistema computadorizado Sperm Class Analyser (SCA®) iniciando em 10 segundos após o início da ativação espermática e repetindo a intervalos de 5 segundos durante 55 segundos. Foram avaliados os seguintes parâmetros de cinética espermática: motilidade total (MT - %); motilidade progressiva (MP - %); velocidade curvilinear (VCL - µm.s-1); velocidade em linha reta (VSL – µm.s-1); e velocidade do trajeto médio (VAP - µm.s-1). Para a fertilização, foram testadas quatro relações espermatozoides:ovócito, entre 10.000 e 500.000, e três ativadores, NaHCO3, NaCl e a água do tanque dos reprodutores. Para os parâmetros de cinética espermática, tanto para o sêmen in natura quanto para o sêmen criopreservado, o NaHCO3 manteve por mais tempo a ativação dos espermatozoides sem alterações significativas quando comparado ao NaCl e a água do tanque. As melhores relações espermatozoides:ovócito observadas foram 10.000:1 para o sêmen in natura quando se utilizou o NaCl como ativador (taxa de fertilização= 87 ± 2%) e entre 100,000 e 250.000:1 para o sêmen criopreservado utilizando tanto o NaHCO3 quanto o NaCl como ativadores (taxa de fertilização= 69 ± 6%). A utilização da água do tanque de contenção dos reprodutores não foi eficiente na ativação da motilidade espermática e durante os procedimentos de fertilização artificial de ovócitos de tambaqui, principalmente quando o sêmen criopreservado foi utilizado. Conclui-se que soluções salinas de NaHCO3 e NaCl 230 mOsm.kg-1 apresentam-se como ativadores mais adequados na fertilização artificial de ovócitos do tambaqui, principalmente quando é utilizado o sêmen criopreservado. É possível o emprego da relação espermatozoides:ovócito 10.000:1 e de 100.000 a 250.000:1 na fertilização do tambaqui com sêmen in natura e criopreservado, respectivamente.
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ALANA FREIRE DE AZEVEDO
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PERFIS DE ÁCIDOS GRAXOS EM ISOLADOS DE Leishmania spp. COM RESISTÊNCIA NATURAL AO ÓXIDO NÍTRICO E AO TRIVALENTE
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Orientador : ROBERTA PEREIRA MIRANDA FERNANDES
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Data: 21/02/2013
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Dissertação
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Ácidos graxos, especialmente aqueles de fosfolipídeos (PLFA), são componentes essenciais das membranas biológicas que estão em proporção relativamente constante em condições naturais. No entanto, sob condições adversas de crescimento, como doenças, mudanças ambientais e exposição a substâncias químicas, pode ocorrer uma variação na proporção dos lipídeos. A identificação destas modificações específicas pode revelar um biomarcador. Assim, os biomarcadores podem ajudar, por exemplo, na identificação de um mecanismo de virulência e de resistência a um agente quimioterápico particular. Portanto, um biomarcador específico pode levar a uma melhor decisão terapêutica, a respeito da indicação e escolha de drogas, tornando o tratamento mais eficaz. O objetivo deste estudo foi comparar os perfis de ácidos graxos de L. chagasi e L. amazonesis em isolados resistentes e sensíveis a antimônio (Glucantime ®) e óxido nítrico (NO). Os lipídios totais foram extraídos a partir de formas promastigotas liofilizadas em fase tardia de crescimento logarítmico (50 mL células 5x108/mL). Foram estudados 2 isolados de L. amazonensis e 8 de L. chagasi. Os ésteres metílicos de ácidos graxos (FAMEs) foram obtidos a partir de lipídeos totais, lipídeos e fosfolipídeos éster ligados, respectivamente, pelas técnicas MIDI, ELFA e PLFA. Os FAMEs foram analisados por espectrometria de massa e cromatografia gasosa. Diferenças nos perfis de ácidos graxos associadas a espécies ou resistência foram avaliadas por escalonamento multidimensional não métrico, procedimentos de permutação de respostas múltiplas e análises indicadoras de espécies, usando o PC-ORD 6.0. Anteriormente a essas análises, as massas molares individuais dos FAMEs foram relativizadas por FAMEs totais dentro de cada amostra. Os isolados resistentes e sensíveis ao NO e ao antimônio apresentaram diferentes perfis FAME-MIDI, independentemente da espécie. No entanto, os perfis de ELFA e PLFA não diferiram entre os isolados sensíveis e resistentes. O ácido graxo 18:1 δ9c foi aumentado em isolados sensíveis (p <0,001), ao passo que um pico ainda não identificado mostrou a tendência oposta (p <0,01). Assim, podemos concluir que esses dois ácidos graxos são potenciais biomarcadores para sensibilidade e resistência ao NO e ao antimônio em L. chagasi e L. amazonesis e podem ajudar no diagnóstico terapêutico.
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PATRÍCIA CERPE
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“COMPLEXOS DE INCLUSÃO DE ÓLEO ESSENCIAL DE Lippia gracilis SCHAUER E β-CICLODEXTRINA: UMA ALTERNATIVA NO CONTROLE DAS LARVAS DE Aedes aegypti”
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Orientador : ROGERIA DE SOUZA NUNES
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Data: 20/02/2013
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Dissertação
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CERPE, Patricia. Complexo de inclusão óleo essencial de Lippia gracilis Schauer e β-Ciclodextrina: uma alternativa no controle das larvas de Aedes aegypti. Sergipe: UFS, 2013. 53 p. (Dissertação - Mestrado em Biotecnologia).
Em termos de morbidade e mortalidade, a dengue é considerada atualmente a mais importante doença viral humana transmitida por mosquitos, causada por vírus da família Flaviridae, transmitida, no Brasil, através do mosquito Aedes aegypti Linnaeus, sendo um dos principais problemas de saúde pública no mundo, devido ao grande potencial para o desenvolvimento de formas graves e letais da doença. Outro problema enfrentado no controle da dengue é à existência de populações de Aedes aegypti resistentes a toxicidade de inseticidas químicos, como o temefós. Este trabalho envolveu a obtenção e caracterização do complexo de inclusão entre óleo essencial de Lippia gracilis (OELG), com atividade larvicida contra as larvas de Aedes aegypti em β-ciclodextrina (β-CD), objetivando melhorar a solubilidade do óleo em meio aquoso servindo de estratégia para obtenção de novos produtos larvicidas. Para os complexos obtidos por malaxagem e co-evaporação foi avaliada a influência do uso de um co-solvente na preparação dos complexos, pelos métodos malaxagem com água (MAH), malaxagem com etanol/água (MAE), co-evaporação com água (COH) e co-evaporação etanol/água (COE). A determinação do teor do OELG foi obtido por cromatografia gasosa acoplada a espectrômetro de massa (CG/EM), onde o complexo (MAH) mostrou-se superior na inclusão do carvacrol, com teor de 15,25 %, em relação as outras técnicas de preparação. Os complexos foram caracterizados por termogravimetria (TG/DTG), determinação do teor de umidade por Karl-Fischer, calorimetria exploratória diferencial (DSC), difratometria de raios-X (DRX), espectroscopia de absorção na região do infravermelho com transformada de Fourier (FTIR) e na região do ultra violeta (UV-vis), microscopia eletrônica de varredura (MEV) e ensaios de solubilidade. Os ensaios larvicidas contra as larvas de Aedes aegypti foram realizados com as larvas da linhagem Rockefeller no terceiro estádio (L3), sendo verificado a mortalidade após 24 horas. De acordo com os resultados obtido por CG/EM o principal constituinte do OELG, foi o carvacrol (46,7%). Nas curvas TG/DTG e DSC dos complexos revelaram deslocamento no intervalo de degradação térmica do óleo para faixas de temperaturas mais elevadas indicando um ganho de estabilidade térmica. Nas análises de (DR-X) dos complexos demonstraram redução do grau de cristalinidade, quando comparado a β-CD pura. Através da microscopia eletrônica de varredura (MEV) pode-se observar mudanças na morfologia do complexo, quando comparado com a β-CD pura. No estudo do diagrama de fases em diferentes temperaturas, os valores da constante de associação do complexo (MAH), demonstrou serem interações estáveis e que o complexo OELG/β-CD e solúvel em água. As larvas de Aedes Aegypti foram suscetíveis à composição do OELG, carvacrol e do complexo (MAH), utilizando o método de análise Probit. A atividade larvicida do complexo (MAH) foi de CL50 33 ppm, próxima ao do óleo puro de CL50 39 ppm, podendo ser uma alternativa biolarvicida adequada aos programas de controle da dengue.
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ROSIANE DOS SANTOS
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"Desenvolvimento de Novas Ferramentas Biotecnológicas Baseadas em Recusrsos Naturais para o Tratamento de Doença de Alzheimer."
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Orientador : ROSILENE MORETTI MARCAL
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Data: 15/02/2013
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Dissertação
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A doença de Alzheimer (DA) é uma desordem neurodegenerativa responsável pelo maior número de casos de demência em idosos. As regiões cerebrais associadas ao córtex frontal e ao hipocampo são as mais comprometidas pelas alterações decorrentes da DA, resultando em perda da função neuronal, além de perda progressiva da memória e declínio cognitivo. Em nível celular, a DA está associada à redução das taxas de acetilcolina (ACh) no processo sináptico, diminuindo aneurotransmissão colinérgica cortical. A ACh é um neurotransmissor encontrado no cérebro e nas junções neuromusculares, compondo parte do sistema nervoso parassimpático, sua atividade e permanência na fenda sináptica são reguladas por hidrólise catalisadapela acetilcolinesterase (AChE) e pela butirilcolinesterase (BuChE) enzimas que modulam os níveis de ACh no sistema nervoso. A perspectiva por novos alvos inibidores das colinesterases tem estimulado pesquisas utilizando compostos bioativos de origem natural e também a utilização de modelo animal que proporcione melhor compreensão dos mecanismos do desenvolvimento cognitivo. Diante disso, pelo fato deserem microrganismos produtores de metabólitos secundários de grande importância para bioprospecção, foi realizado um estudo da atividade anticolinesterásica de compostos isolados do fungo endofítico Phomopsis sp. (PE) associado à mangabeira (Hancornia speciosa Gomes). Além disso, foi investigado o efeito do mentol sobre a memória de zebrafishadulto através do teste da esquiva passiva. O mentol foi selecionado tomando-se como base o screening realizado por nosso grupo de pesquisa, onde esse composto apresentou potente atividade anticolinesterásica. Na busca por compostos promissores a fármacos anticolinesterásicos, opresente trabalho teve como objetivo a avaliação in vitroda atividade do extrato bruto do fungo, e de seus compostos isolados 5-metil meleína (1), nectriapirona (2), tirosol (3) e triptofol (4) frente às enzimas AChE e BuChE, assim como a avaliação in vivodo efeito do mentol sobre a aprendizagem e consolidação da memória. O extrato bruto do PE e os seus compostos isolados apresentaram efeito na inibição das colinesterases, sendo o triptofol (4) o mais promissor, pois apresentou ação dual sobre as enzimas sendo seletivo para BuChE. O estudo da exposição de zebrafishao mentol revelou que este composto não produz efeito sobre a memória. Por outro lado, em todas as concentrações testadas o mentol foi capaz de reverter a amnésia induzida por escopolamina. Diante dos resultados, conclui-se que os compostos isolados do PE podem ser considerados como alternativas para o desenvolvimento de novos fármacos anticolinesterásicos e que o mentol pode ser indicado como alternativa terapêutica para tratamento de déficits de memória.
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CAMILA SANTOS ALMEIDA PEREIRA
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"Propagação e Conservação In Vitro de Acessos de Jenipapeiro"
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Data: 05/02/2013
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Dissertação
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O jenipapeiro tem grande importância econômica tanto pela sua essência florestal, quanto pela produção de alimentos. A obtenção de protocolos de conservação é importante para a preservação de recursos genéticos. O presente trabalho teve como objetivo estabelecer protocolos de conservação in vitro de jenipapeiro, além de estudos do efeito de diferentes meios de cultura na germinação in vitro de sementes dessa espécie e do efeito de diferentes meios de cultura na indução da embriogênese somática. Os experimentos foram conduzidos no laboratório de Cultura de Tecidos de Plantas da Embrapa Tabuleiros Costeiros, SE e foram utilizadas sementes de plantas matrizes de jenipapeiro provenientes de Cruz das Almas- BA; Povoado Oiteiros- SE e Povoado Siriri- SE. No experimento de conservação foram testadas diferentes concentrações de manitol- ensaio 1; de ABA- ensaio 2; e variações do meio MS e sacarose- ensaio 3. Após 150 dias, as plântulas provenientes do meio de conservação, foram segmentadas e inoculados em meio de regeneração (MS gelificado suplementado com 30 g L-1 de sacarose, BAP (0 e 1 mg L-1) e 4,5 g L-1 de Phytagel®). Para o experimento de germinação foram testadas água destilada e diferentes variações de sais MS e sacarose. Para o experimento da embriogênese somática, plântulas com 90 dias de cultivo in vitro foram segmentadas e transferidas para um novo meio MS suplementado com 30 g L-1 de sacarose e diferentes concentrações de 2,4- Diclorofenoxiacético- 2,4-D (0; 4 e 8 mg L-1) combinadas com quatro concentrações de benzilaminopurina-BAP (0; 1; 2 e 3 mg L-1). Na etapa de conservação, o manitol nas concentrações estudadas não promoveu desaceleração do crescimento das plântulas de jenipapeiro, enquanto, o ácido abscísico promoveu a redução do número de folhas. Os meios MS e ½ da concentração de sais MS na presença de 30 g L-1 de sacarose promoveram a desaceleração do crescimento das plântulas de jenipapeiro, podendo ser recomendados para protocolos de conservação por crescimento lento. Os explantes provenientes do meio de conservação contendo manitol e ácido abscísico mantidos na presença de 1,0 mg L-1 de BAP na fase de retomada, apresentaram maior resposta morfogenética. Os explantes mantidos na fase de conservação na presença de meio MS + 30 g L-1 de sacarose e ½ MS com 15 ou 30 g L-1 de sacarose, apresentaram menor resposta morfogenética na ausência de BAP quando comparado com os demais tratamentos. Na etapa de germinação in vitro, observou-se que na ausência de sais e de sacarose houve maior porcentagem de plântulas normais e menor comprimento da parte aérea. Na etapa da embriogênese somática, a presença de 2,4-D, promoveu maior porcentagem de explantes com resposta morfogenética. O segmento caulinar promoveu maior resposta que o segmento foliar na ausência e na concentração 4 mg L-1 de 2,4-D. Além disso, a presença de BAP induziu menor resposta dessa variável para o explante caulinar e maior resposta para o explante foliar.
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ROSANA BARROSO FEITOSA ALCANTARA
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FENOLOGIA, ADUBAÇÃO ORGÂNICA E MICROPROPAGAÇÃO DE ACESSOS DE SAMBACAITÁ (Hyptis pectinata L. Poit)
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Orientador : MARIA DE FATIMA ARRIGONI BLANK
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Data: 28/01/2013
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Dissertação
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FEITOSA, Rosana Barroso. Fenologia, adubação orgânica e micropropagação de acessos de sambacaitá (Hyptis pectinata L. Poit). São Cristóvão: UFS, 2013. 59p. (Dissertação – Mestrado em Biotecnologia de Recursos Naturais).As plantas medicinais vêm sendo amplamente utilizadas nas últimas décadas com finalidades terapêuticas, impulsionadas pelo alto custo dos produtos farmacêuticos industrializados. Dentre a grande diversidade de plantas medicinais existentes no Brasil, está o sambacaitá ou canudinho (Hyptis pectinata L. Poit), que se destaca por sua ampla utilização nos tratamentos de infecções bacterianas, dores e inflamações. O intenso extrativismo das plantas medicinais tem feito diversas espécies entrarem em extinção. Por isso é necessário o entendimento dos mecanismos das plantas para a adequação de técnicas de cultivo e de propagação vegetativa que visem à sustentabilidade e a produção em larga escala. Nesse contexto, esse trabalho teve como objetivo, realizar o estudo fenológico, avaliar a influência de doses de esterco bovino e alturas de corte e estabelecer um protocolo de micropropagação de H. pectinata. Para o estudo da fenologia foram feitas avaliações semanais em plantas com e sem irrigação. Para avaliar a influência de doses de esterco bovino e alturas de corte, o experimento foi montado em blocos casualizados, usando esquema de parcelas subdivididas, colocando-se nas parcelas as doses de esterco, e nas subparcelas, as alturas de cortes da planta. Nos ensaios de micropropagação foram testados diferentes concentrações de reguladores de crescimento. Por fim, para o ensaio de aclimatização foram testados diferentes substratos contendo pó de coco e/ou vermiculita. Para as condições do Estado de Sergipe observou-se que o início da floração das plantas de H. pectinata, ocorre no final de julho, na estação chuvosa, que no início de outubro ocorra à dispersão das sementes, a partir de final de outubro as plantas entram em senescência. Notou-se que a H. pectinata é uma planta anual. H. pectinata suporta três colheitas e o corte a 20 cm do solo resultou em melhor rebrota. A adubação orgânica não é fator limitante para o cultivo de H. pectinata. Os acessos SAM-016, SAM-017 e SAM-018 de H.pectinata pode ser micropropagado em 50% dos sais do MS na ausência de regulador de crescimento. A aclimatização das mudas micropropagadas pode ser realizada no substrato pó de coco + 1g.L-1 de calcário + sais do MS.
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