Banca de QUALIFICAÇÃO: IZABEL PESQUEIRA RIBEIRO DE ARAUJO
11/04/2022 15:39
Nos últimos anos a papaína, assim como outras enzimas de cisteíno proteasestêm sido utilizadas como alvo terapêutico para a descoberta de novos fármacos,e a utilização de espécies vegetais do gênero Passiflora na medicina tradicionalindicam o potencial biológico dessas plantas, o que torna importante a realizaçãode estudos químicos, biológicos e farmacológicos, entre a espécie vegetal e ascisteíno proteases. Por esse motivo, o objetivo deste trabalho é isolar inibidoresde cisteíno proteases (papaína) por meio do isolamento bioguiado com espéciesde Passiflora. As espécies selecionadas para o estudo foram: P. cincinnata, P.edulis e P. foetida. Os extratos brutos das espécies vegetais foram obtidos pormaceração utilizando etanol. O extrato bruto da parte aérea mais ativa foifracionado por partição líquido-líquido (PLL), utilizando hexano, diclorometano eacetato de etila. A fração com maior inibição enzimática foi submetida acromatografia liquida clássica (CLC) e posteriormente as subfrações mais ativasforam analisadas e submetidas ao isolamento por cromatografia líquida de altaeficiência (HPLC). Extratos, frações e subfrações foram avaliados quanto aoefeito de inibição da papaína nas concentrações: 125; 250 e 500 μg.mL-1 paraos extratos, e 500 μg.mL-1 para as frações e subfrações. Os compostos fenólicostotais e flavonoides totais dos extratos foram quantificados em espectrofotômetroutilizando o reagente Folin-Ciocalteu e AlCl3, respectivamente. Apósmonitoramento de inibição enzimática com os extratos das três espécies,observou-se que a Passiflora foetida (PF) apresentou a maior inibição (40,2%).Dentre os extratos obtidos das partes aéreas dessa espécie, o extrato dos galhos(PFG) teve o maior percentual de inibição (47,2%). Este extrato, apresentou teorde compostos fenólicos e flavonoides de 49,42 ± 0,92 mg EqAG/g, e 19,39 ±1,98 mg EqQUE/g, respectivamente. Além da presença de flavonoides,detectou-se a presença de antraquinonas, alcaloides, triterpenos e ácidosgraxos. A fração diclorometano (PFGD), obtida do extrato PFG após PLL,apresentou a maior inibição enzimática (38,31%). Desse modo esta fração foisubmetida a CLC e suas subfrações submetidas a avaliação de inibição dapapaína. As subfrações PFGD-C (64,63%), PFGD-D (57,24%) e PFGD-E(45,83%) apresentaram os melhores resultados de inibição enzimática, e porisso foram selecionadas para o isolamento por HPLC. Iniciou-se o isolamentocom a PFGD-E por possuir a maior massa (340mg) entre as subfrações. Apósotimização da separação cromatográfica da subfração PFGD-E realizou-se acoleta de seis frações. Estas amostras estão em processo de análise por RMNpara a elucidação estrutural das substâncias isoladas. As subfrações PFGD-C ePFGD-D foram analisadas por HPLC, mas ainda precisam de otimização paraobter uma melhor separação dos picos. Após o isolamento das substânciasdessas frações, novos ensaios de inibição enzimática serão realizados para averificação se estas substâncias são as responsáveis pelo efeito de inibição da papaína.
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